不雅察人参皂苷R h2对人白血病细胞株H L60增殖和凋亡的调理感化。

方式：操纵流式细胞术检测白血病细胞株H L60在人参皂苷R h2处置进程中细胞增殖周期的改变和凋亡产生的环境；另外一方面经由过程动物尝试，将药物处置前后的细胞株打针裸鼠，验证该药物是不是可以或许有用按捺H L60细胞在动物体内的恶性增殖和白血病症状。

成果：药物处置后的H L60细胞在G 1 期比例下降，S期比例显著升高（P<0.05），药物处置后H L60细胞初期和中晚期细胞凋亡率为40% 摆布，较着高在未处置组H L60细胞，人参皂苷R h2经由过程介导S期阻滞感化从而使H L60细胞进入凋亡法式。

经由过程动物尝试证实了人参皂苷R h2可以或许按捺H L60细胞在体内的恶性增殖。结论：人参皂苷R h2可以或许按捺人白血病细胞株H L60的恶性增殖并增进其产生凋亡。人参是西医药保守的补气要药，以其攻补兼施、毒副感化小或无、重视全体的优胜性已获得普遍承认。

人参皂苷单体R h2是从红参中提取的自然活性成份，具有很高的抗肿瘤活性。以人白血病H L60细胞株为受试对象，研究人参皂苷单体R h2对H L60细胞增殖和凋亡的影响，为进一步说明人参皂苷单体抗白血病感化的机制，使其利用在白血病的临床医治供给更多的尝试根据。材料与方式1. 材料1.1 细胞培育 H L60细胞为第二军医年夜学医学发育生物学中间奉送，用含10％小牛血清（杭州四时青生物公司）的R PM I1640（Gibco）在37℃、5％CO 2 的培育箱中培育。细胞培育板、培育瓶、培育皿（FALCON，BD）。

1.2 人参皂苷Rh2配液 人参皂苷Rh2（购买上海同田生物手艺无限公司）溶在PBS（pH 值7.4）中配成50g/L母液，超滤除菌，-20℃保留备用。用R PM I1640配成所需工作浓度50m g/L，4℃保留备用。1.3 动物 BA LB/c Nu品系裸鼠共24只，3-5周龄，牝牡参半，体质量约15-25g，购自上海斯莱克尝试动物无限义务公司，及格证批号为SXCK（沪）2007-0005。

2. 方式2.1 不雅察人参皂苷单体Rh2对细胞发展的按捺感化 取对数发展期细胞制成细胞悬液，浓度1×10 4 /m L，接种在24孔培育板内，每孔1m L。6h后插手分歧浓度的人参皂苷单体R h2，使终浓度别离为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00m g/L，每质量浓度组均设4孔。12、24、36、48、60、72h，每次取3孔细胞，悄悄奏乐平均，血细胞计数板（密理博细胞计数器）计数，每孔数3次，计较细胞发展按捺率。细胞发展按捺率=[1-（处置组细胞绝对数/对比组细胞绝对数）] × 。

2.2 细胞凋亡检测 别离搜集未处置组H�����APP L60细胞和药物处置组H L60细胞，每组约为2×10 5 个细胞，离心去上清，插手100μL PBS。室温避光孵育30m in后，2m L PBS洗涤2遍，插手400μL PBS，上机检测前5m in插手5μL PI（50μg/μL）。流式细胞仪LSRⅡ（BD Biosciences）计数10 000个细胞，检测细胞凋亡。

2.3 细胞周期测定 搜集未处置组H L60细胞和工作浓度药物处置3d后H L60细胞，每组约为1×10 6 个细胞，至离心管中，离心去上清后插手70% 乙醇，混匀，4℃固定24h。将固定过的细胞用PBS洗2遍，插手100μL PBS，混匀。插手50μL R NA酶（1m g/m L）37℃消化30m in，各管再插手400μL PBS并将细胞液转入响应流式管中，上机前5m in各管加50μL PI（250μg/μL），混匀。流式细胞仪计数10 000个细胞，检测细胞周期散布；阐发软件采取M odfit LT 3.0。

2.4 在体裸鼠动物尝试 BALB/c Nu品系裸鼠共24只，随机分为3组。搜集药物处置后的H L60细胞和野生组H L60细胞，每组取2×10 5 细胞，离心去上清，插手200μL PBS，取1m L打针器抽取细胞悬液打针入裸鼠腹部皮下。SPF级豢养，逐日不雅察。各组裸鼠别离在打针细胞后1个月颈椎脱臼活杀，不雅察组织和器官的色彩、光泽、质地、有没有结节等。别离取肺脏、肝脏、肾脏、脾脏等组织器官，福尔马林固定后H E染色进行病理学查抄。

2.5 统计学方式 采取SPSS 17.0软件进行数据阐发，整体采取方差阐发，P＜0.05暗示差别有统计学意义。

成果1. 人参皂苷R h2对H L60细胞发展的按捺感化 人参皂苷R h2可较着按捺H L60细胞的增殖，并呈剂量和时候依靠性，适药物浓度为50μg/m L、时候为72h对细胞增殖影响转变较着，药物处置组细胞的发展按捺率达42.5% 。2. 人参皂苷R h2对H L60细胞周期的影响 工作浓度药物处置细胞3d落后行流式细胞周期检测，图1成果显示对比组G 1期细胞占72.85% 、S期细胞占20.76% 、G 2 期细胞占6.39% 。药物处置组G 1 期细胞占38.32% 、S期细胞占55.97% 、G 2 期细胞占5.71% 。

两组实验数据方差阐发成果为：P=0.000<0.05，提醒人参皂苷R h2可介导H L60细胞产生S期的阻滞感化。3. Annexin V-FITC/PI双染色法流式细胞检测细胞凋亡：从图2双标识表记标帜的流式散点图上显示：左下象限是活细胞，即FITC-/PI-；右上象限是坏死细胞和凋亡晚期细胞，即FITC+/PI+；右下象限是初期凋亡细胞，即FITC+/PI-；经由过程阐发计较可获得各类型细胞的比例。流式成果显示药物处置后坏死细胞和凋亡晚期细胞占总细胞比例的40.80% ，初期凋亡细胞占总细胞比例的41.99% ，而未处置组H L60细胞坏死细胞和凋亡晚期细胞占总细胞比例的6.00% ，初期凋亡细胞占总细胞比例的7.45% ，两组尝试数据方差阐发成果P=0.000<0.05，提醒人参皂苷Rh2可以或许增进H L60细胞产生凋亡。4. 动物一般环境不雅察 不雅察发觉，打针未处置H L60细胞株组的裸鼠与打针人参皂苷R h2处置后的H L60细胞株和对比组裸鼠比拟，打针1-2周最先瘦削而且不爱活动。8周后最先活杀裸鼠，并进行周全的年夜体剖解查抄，发觉打针了未处置组H L60细胞株的裸鼠脾脏均有分歧水平的肿年夜增生环境。肿年夜的脾脏概况滑腻，质地柔嫩。而打针了药物处置后H L60细胞株的裸鼠脾脏增生较弱。5. 各脏器病理查抄 打针了未处置组H L60细胞株的裸鼠的脾脏、肝脏、肺脏和肾脏等器官有较着的炎症、肿胀、充血和年夜量淋巴细胞浸湿现象，有坏死产生。